Floresan-rezonans energiya uzatish (FRET)
Floresan-rezonans energiyasini uzatish (FRET) - bu radiatsiyaviy bo'lmagan energiya uzatish jarayoni bo'lib, unda molekulalararo elektr juftlarining o'zaro ta'siri orqali donorning qo'zg'atilgan holati energiyasi akseptorning qo'zg'aluvchan holatiga o'tkaziladi.Bu jarayon fotonlarni o'z ichiga olmaydi va shuning uchun radiatsiyaviy emas.Ushbu tahlilning afzalliklari tez, sezgir va sodda.
FRET tahlilida ishlatiladigan bo'yoq bir xil bo'lishi mumkin.Ammo ko'pgina ilovalarda aslida turli xil bo'yoqlardan foydalaniladi.Qisqacha aytganda, yorug'lik rezonans energiyasini uzatish donor guruhi qo'zg'alganda, donordan (bo'yoq 1) akseptorga (bo'yoq 2) juft dipollarni o'tkazishdir.Umuman olganda, Donor florofor guruhining emissiya spektri qabul qiluvchi guruhining yutilish spektri bilan mos keladi."Ikki ftorofor orasidagi masofa mos bo'lganda (10 - 100 A), florofor energiyasining donordan qabul qiluvchiga o'tishi kuzatilishi mumkin."Energiyani uzatish usuli retseptorning kimyoviy tuzilishiga bog'liq:
1. Molekulyar tebranishga aylanadi, ya'ni energiya uzatishning yorqin nuri yo'qoladi.(Retseptor yorug'likni o'chiruvchi vositadir)
2. Emissiya retseptorning o'ziga qaraganda kuchliroqdir, buning natijasida ikkilamchi floresan spektrida qizil siljish sodir bo'ladi.(Retseptorlar yorug'lik chiqaradiganlar).
Donor guruhi (EDANS) va qabul qiluvchi gen (DABCYL) OIV proteazasining tabiiy substrati bilan bir xilda bog'langan va agar substrat uzilmagan bo'lsa, DABCYL EDANSni susaytiradi va keyin ftorga aniqlanmaydi.OIV-1 proteazasi uzilganda, EDANS endi DABCYL tomonidan o'chirilmaydi va keyinchalik EDANS lusiferazalarini aniqlash mumkin.Proteaz inhibitörlerinin mavjudligi EDANS ning floresans intensivligidagi o'zgarishlar orqali kuzatilishi mumkin.
FRET peptidlari peptidazaning o'ziga xosligini o'rganish uchun qulay vositalardir.Uning reaktsiya jarayonini doimiy ravishda kuzatib borish mumkinligi sababli, u ferment faolligini aniqlash uchun qulay usulni ta'minlaydi.Donor/akseptor tomonidan peptid aloqalarining gidrolizlanishidan keyin hosil bo'lgan porlash nanomolyar konsentratsiyalarda ferment faolligini o'lchash imkonini beradi.FRET peptidi buzilmagan bo'lsa, u ichki chaqnashning to'satdan yo'qolishini ko'rsatadi, ammo donor/akseptorga qarama-qarshi bo'lgan har qanday peptid aloqasi uzilganda, u doimiy ravishda aniqlanishi mumkin bo'lgan chaqnash chiqaradi va keyin ferment faolligini miqdoriy aniqlash mumkin.
Yuborilgan vaqt: 2023 yil 14-avgust