Biologik tadqiqotlarda odatda uzoq ketma-ketlikka ega polipeptidlar qo'llaniladi.Ketma-ketlikda 60 dan ortiq aminokislotalarga ega bo'lgan peptidlar uchun gen ifodasi va SDS-PAGE odatda ularni olish uchun ishlatiladi.Biroq, bu usul uzoq vaqt talab etadi va yakuniy mahsulotni ajratish effekti yaxshi emas.
Uzoq peptid sintezi uchun muammolar va yechimlar
Uzoq peptidlarni sintez qilishda biz doimo muammoga duch kelamiz, ya'ni sintezdagi ketma-ketlikning ortishi bilan kondensatsiya reaktsiyasining sterik to'siqlari ortadi va reaktsiya to'liq bo'lishi uchun reaktsiya vaqtini sozlash kerak.Biroq, reaksiya vaqti qanchalik uzoq bo'lsa, ko'proq yon ta'sirlar ishlab chiqariladi va maqsadli peptidning bir qismi hosil bo'ladi.Bunday qoldiqlar - etishmayotgan peptid zanjirlari uzoq peptid sintezida hosil bo'lgan asosiy aralashmalardir.Shuning uchun, uzoq peptid sintezida, biz engishimiz kerak bo'lgan asosiy muammo, aminokislotalar kondensatsiyasi reaktsiyasini yanada kengroq va to'liqroq qilish uchun yuqori sifatli reaktsiya sharoitlarini va reaktsiya usullarini o'rganishdir.Bunga qo'shimcha ravishda, reaktsiya vaqtini kamaytiring, chunki reaktsiya vaqti qanchalik uzoq bo'lsa, nazoratsiz yon reaktsiyalar qanchalik ko'p bo'lsa, yon mahsulotlar shunchalik murakkab bo'ladi.Shunday qilib, quyidagi uchta nuqta umumlashtiriladi:
Mikroto'lqinli sintezdan foydalanish mumkin: Integratsiyalash oson bo'lmagan sintez jarayonida uchraydigan ba'zi aminokislotalar uchun mikroto'lqinli sintezdan foydalanish mumkin.Ushbu usul ajoyib natijalarga ega va reaktsiya vaqtini sezilarli darajada kamaytiradi va ikkita asosiy qo'shimcha mahsulot hosil bo'lishini kamaytiradi.
Fragment sintez usulidan foydalanish mumkin: Ba'zi peptidlarni umumiy sintez usullari bilan sintez qilish qiyin bo'lsa va tozalash oson bo'lmasa, biz peptidning ma'lum bir segmentidagi bir nechta aminokislotalarning butun kondensatsiyasini butun peptid zanjiriga qabul qilishimiz mumkin.Bu usul sintezdagi ko'plab muammolarni ham hal qila oladi.
Asilhidrazid sintezidan foydalanish mumkin: peptidlarning asilhidrazid sintezi N-terminal Cys peptid va C-terminal polipeptid gidrazidning peptid bog'lanish usuliga erishish uchun amid aloqalarining shakllanishi o'rtasidagi kimyoviy selektiv reaktsiyaning qattiq fazali sintezi usuli hisoblanadi.Peptid zanjiridagi Cys pozitsiyasiga asoslanib, bu usul butun peptid zanjirini bir nechta ketma-ketliklarga ajratadi va ularni mos ravishda sintez qiladi.Nihoyat, maqsadli peptid suyuqlik-fazali kondensatsiya reaktsiyasi orqali olinadi.Bu usul nafaqat uzoq peptidning sintez vaqtini sezilarli darajada qisqartiradi, balki yakuniy mahsulotning tozaligini sezilarli darajada oshiradi.
Uzoq peptidlarni tozalash
Uzoq peptidlarning o'ziga xosligi muqarrar ravishda xom peptidlarning murakkab tarkibiy qismlariga olib keladi.Shu sababli, HPLC yordamida uzoq peptidlarni tozalash ham qiyin.polipeptidlarni tozalash jarayonining amiloid seriyasi, ko'p tajribani o'zlashtiradi va uzoq peptidni tozalashda muvaffaqiyatli qo'llaniladi.Yangi uskunani qabul qilish, bir nechta tozalash tizimlarini aralashtirish, takroriy ajratish va boshqa tajriba usullarini qo'llash orqali uzoq peptidlarni tozalashning muvaffaqiyat darajasi sezilarli darajada yaxshilandi.
Xabar vaqti: 2023 yil 18 aprel